无菌室沉降菌测试标准操作规程

一、目的:建立无菌室中沉降菌的测试标准操作规程,保证微生物检验在规定洁净级别内进行。
 
二、范围:无菌室的沉降菌的监测。
 
三、依据:国家标准GB/T 16294-1996。
 
四、职责:微生物检验人员对本制度的实施负责。
 
五、内容
 1、菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU。通常用个数表示。
2、测试方法:沉降法,即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿,经48小时以上培养,在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数,来评定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室的洁净度。
3、所用的仪器和设备
1)高压灭菌锅锅
2)恒温培养箱:必须定期对培养箱进行检定。
3)培养皿:一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟。
4、培养基:普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化,冷却**约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿,每皿约15m1。待琼脂培养基凝固后,将培养基平皿放入30~35℃恒温培养箱中培养数小时,若培养基平皿上确无菌落生长,即可供采样用,制备好的培养基平皿应在2~8℃的环境中存放。
5、测试步骤
1)采样方法:将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点,打开培养皿盖,使培养基表面暴露0.5小时,再将培养皿盖上盖后倒置。
2)培养,时间不少于48小时。每批培养基应有对照试验,检查培养基本身是否污染,可每批选定3只培养皿作对照培养。
3)菌落计数:用肉眼直接计数,然后用5~10倍放大镜检查,有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。
6、注意事项
1)测试用具要做灭菌处理,以确保测试的可靠性、正确性。
2)采取一切措施防止人为对样本的污染。
3)对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4)由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别,必要时用显微镜鉴别。
5)采样前应仔细检查每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。
7、测试规则
1)测试状态
(1)沉降菌测试前:被测试洁净室(区)的温湿度须达到规定的要求,静压差、必须控制在规定值内。被测试洁净室(区)已消毒。
(2)测试状态有静态和动态两种,并在报告中注明测试状态。
(3)测试人员:测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。静态测试时,室内测试人员不得多于2个人。
2)测试时间
(1)对单向流,如100级净化房间内及层流工作台,测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
(2)对非单向流,如10000级、100000级以上的净化房间,测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
8沉降菌计数
1)**少采样点数目:可按表1确定。在满足**少测点数的同时,还宜满足**少培养皿数,见表2。
表1 **少采样点数目
面积(m2)  洁净度级别
  100  10000  100000  300000
<10  2~3  2
≥10~<20  2
≥20~<40  2
≥40~<100  16  2
≥100~<200  40  10  3
注:表中的面积对于单向流洁净室是指送风面积,对于非单向流洁净室是指房间面积。
表2 **少培养皿数
洁净度级别  所需Φ90mm培养皿数(以沉降0.5小时计)
100 14
10000 2
100000 2
300000 2
2)采样点的布置:工作区测试点位置离地0.8~1.5m左右(略高于工作面)。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点,采样点的布置应力求均匀,避免采样点在某 局部区域过于集中,某局部区域过于稀疏。

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