组织培养-无菌室操作规程

1. 无菌室室内温度保持在20-24℃,湿度保持在45-60%;室内应保持清洁,严禁堆放杂物,以防污染;
2. 无菌室应备有工作浓度的消毒液,如75%的酒精,0.1%的新洁尔灭溶液,优氯净,碘伏等等;无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁,以保证无菌室的洁净度符合要求;
3. 需要带入无菌室使用的器械,玻璃器皿等一切物品,均应包扎严密,并应经过适宜的方法灭菌(一般采用高温高压灭菌,1.2个大气压,121-126℃,30分钟);
4. 工作人员进入无菌室前,必须修剪指甲,用肥皂或消毒液洗手消毒,然后在缓冲间更换专用工作服,鞋,帽子,口罩和手套(或用75%的乙醇再次擦拭双手),方可进入无菌室进行操作;
手的清洁流程:
(1)取下手上的饰物及手表,调节合适的水流,浸湿双手;
(2)取肥皂或适量肥皂液液涂抹双手;
(3)按“六部洗手法”顺序搓洗双手:
①掌心对掌心,两手并拢相互搓擦;
②手心对手背,手指交错相互搓擦(交换);
③掌心相对,手指交叉沿指缝相互搓擦;
④用一只手握住另一只手拇指旋转搓擦(交换);
⑤弯曲一手手指各关节,在另一只手掌心旋转搓擦(交换);
⑥指尖在掌心转动搓擦(交换);
(4)浸湿手的前臂部分(手腕**手肘),取肥皂或适量肥皂液液涂抹前臂,用手掌认真搓擦(交换);
(5)流水冲洗,腕部略高于肘部,使污水从指尖流**手腕,防止水流入衣袖。
5. 无菌室使用前须用75%的乙醇擦拭超净工作台台面及四周,必须打开无菌室的紫外灯灭菌30分钟以上,同步开启臭氧消毒机,辅助进行臭氧消毒,同时打开超净工作台紫外灯并开启风扇按钮进行吹风。紫外灭菌结束后,关闭紫外灯及臭氧消毒机30分钟后才能进入无菌室进行操作;
6. 进入超净工作台开始工作前,必须先开启风扇及工作灯,点燃酒精灯,用75%的乙醇认真擦拭双手,之后才能进行工作;
7. 操作结束后,应及时清理无菌室,进行清扫:
①将使用过的操作工具及废液缸从超净工作台上取出;
②先用碘伏消毒液擦拭超净工作台台面及四周,再用75%的乙醇擦拭一遍,使其恢复成使用前状态;
③使用新吉尔灭液或碘伏消毒液进行地板擦拭等清洁工作,再用紫外灯辐照灭菌20分钟。
④在缓冲间脱下专用工作服,帽子,口罩,放回原位,离开缓冲间换下专用鞋子,结束工作。
8. 供试品(培养基、母苗)及包扎好的其他物品在开启前,应保持外包装完整,不得在超净工作台以外环境开启,以防污染。开启前,用75%的酒精棉球或消毒纱布认真擦拭外表面;
9. **次进行无菌操作前,应做阴性空白对照,以检查无菌操作、高压灭菌、培养室的可靠性;后期陆续操作过程中,若出现大面积污染,则下一批次操作应做阴性空白对照,以便查明污染原因;
10. 工作人员必须在每瓶分苗完毕的培养基瓶外做好标记,标记为“工作台号+培养基批次”,如工作台号为01,培养基批次为01,则标记为“0101” ;
11. 工作过程中出现饮水、上厕所等情况暂时离开无菌室后,工作服等应脱下并放置于隔离室衣帽架上,不得穿戴离开隔离室;再次进入前须重复规程“4” 中的步骤;

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