苏州安泰净化工作台在山楂叶·果和籽提取液抗氧化性研究中的应用

1.1 材料与试剂山楂叶、果和籽:采于连云港中云乡,自然晾干,粉碎,过40目筛。芦丁(中国药品生物制品鉴定所);无水乙醇、硝酸钠、硝酸铝、硫酸、氢氧化钠均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司);氯化钠分析纯(南京化学试剂有限公司);磷酸钠、钼酸铵、BHT均为分析纯(上海试验试剂有限公司)。1.2仪器设备DJ讲移液枪(大龙医疗设备有限公司);BS.124S电子分析天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公司];UV-722S分光光度计(上海棱光技术有限公司);DK一$24型电热恒温水浴锅(上海精宏试验设备有限公司);SW-CJ一1 F洁净工作台(苏州安泰空气技术公司);LS.B50L立式压力蒸汽灭菌器(上海华线医用核子仪器公司)。
1.3试验方法
1.3.1 山楂叶、果和籽提取液的制备。分别取一定量山楂叶、果和籽粉末样品,以70%乙醇作为浸提溶剂在85℃恒温水浴下浸提2 h,过滤,得到相应提取液。
1.3.2 山楂叶、果、籽提取液中总黄酮含量的测定【8 J。1.3.2.1 标准曲线的绘制。精确称取5 mg芦丁对照品,用60%乙醇溶解转移**50 rnl容霞瓶中。定容,得到10 ms/ml 的芦丁标准品乙醇溶液。分别准确移取0、l、2⋯3 4 5 ml上述溶液于10 I【ll容量瓶中,加入0.3 ml 10%硝酸钠溶液,摇匀,放置6 min,加入0.3 ml 10%硝酸铝溶液,摇匀,放置6min,加入4 ml 1 mol/L氢氧化钠溶液,分别用60%乙醇定容,摇匀,放置15 min,以l号容量瓶中溶液为空白,在波长510 nm处测定吸光度。
1.3.2.2总黄酮含量的测定。采用硝酸铝比色法。将山楂叶、果和粉末提取液在波长510姗处测得吸光度,用标准曲线回归方程计算得到提取液中总黄酮含量。
1.3.3 山楂叶、果和籽提取液的处理。先将6个大药瓶高压蒸汽灭菌,再将20 rnl山楂叶、果和籽提取液分别装入6个无菌大药瓶中(每种各放2个无菌大药瓶),由于黄酮不耐高温高压,因此采用巴氏消毒与间歇灭菌相结合的方法进行灭菌。将6个装有提取液的大药瓶置于水浴锅中,80℃灭菌15 s,再取出药瓶,置于37℃培养箱中保温过夜,第2天再进行1次巴氏消毒。重复3次。
1.3.4抗氧化活性测定一J。采用磷钼络合物法。分别配制与山楂叶、果和籽提取液中总黄酮含量相同的BHT溶液作为对照组溶液BHT,、BHT2、BH%,进行测定。在lO IIll具塞
刻度比色管中各加入1.0 ml已灭菌山楂叶提取液、1.0 ml同浓度的BHT及1.0 ml山楂叶提取液与同浓度BHT的混合物,每管均加入1.O lnl 0.6 mol/L心S04溶液,1.0 Inl 0.028mol/L Na_3P04溶液,1.0 m10.004 tool/L(NH4)6M07024溶液,加入蒸馏水定容**5.O Illl,摇匀,置95℃水浴中加热反应O一150 min,每30 min取出1支,冷**室温,测定波长695 nm。。处的吸光度,空白对照用1.0 rnl 70%乙醇做同样的处理。山楂果和籽的测定方法同上,所有测定平行进行3次,取其平均值。根据吸光度大小可比较山楂叶、果和籽提取液与BHT的抗氧化能力。

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