摘要 目的：选用的消毒剂（PROCESS VESPHENE II）能符合药厂无菌室使用要求而进行该消毒剂的验证。结果 PROCESS VESPHENE II经实验室确认和无菌室使用后环境监测结果符合公司标准。
关键词：PROCESS VESPHENE II 消毒剂 验证
制药企业洁净室通常都使用一种以上的消毒剂进行洁净室消毒。一般在选择一个消毒剂时，应考虑消毒剂是否能广谱地杀灭微生物；对人体无害；无腐蚀性，对设备无污染；具有洗涤剂作用；具有稳定性；作用迅速；不因有机物的存在而失去活性；产生所期望的后效作用；廉价。
我公司在进行消毒剂供应商调查过程中发现，奥星公司代理的美GSteris公司生产的消毒剂产品包装轻巧（单剂量包装），经γ射线辐射灭菌，适合无菌室清洁消毒使用 ，结合公司实情，选择了碱性苯酚类清洁消毒剂（PROCESS VESPHENE II）产品进行验证。
1. 实验室确认
2. 1.1目的
消毒剂验证shou先是在实验室进行对代表细菌的有效杀灭情况进行确认，符合要求后用于洁净区域清洁，作环境验证。本方法通过特定的微生物与待确认的消毒剂（使用浓度下）接触后，对微生物进行培养、计数，考察消毒剂的效果。
1. 2实验用具
2. 1.2.1 指示菌种
金黄色葡萄球菌
白色念珠球菌
1.2.2 SCD预制培养基平板 用于细菌培养计数
按照SCD干粉培养基配制说明书制备，保存。
1.2.3 TSB液体培养基 用于细菌增殖培养
按照TSB干粉培养基配制说明书制备，保存。
1.2.4 无菌具塞试验管（15ml）
1.2.5 MILIPORE微生物限度试验过滤装置
1.2.6 无菌纯化水
MILI-Q超纯水于121℃，15分钟灭菌后冷却备用。
1.2.7 无菌生理盐水
0.9g氯化钠溶于100ml的MILI-Q超纯水，于121℃，15分钟灭菌后冷却备用。
1.3 待验证消毒剂（ PROCESS VESPHENE II）
1.3.1待验证消毒剂的配制
PROCESS VESPHENE II（1：128稀释）：吸取该消毒剂2毫升，用无菌纯化水稀释**256毫升。然后分注10ml于无菌具塞试验管，共分注15管备用。
1.3.2 指示菌增殖培养物
取金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌分别接种于TSB液体培养基，于23.5℃培养24-48小时即得，培养后微生物浓度应不少于106个/ml。
1.3.3 验证用消毒剂的配制和准备工作
按使用浓度稀释消毒剂**500ml。
取10ml稀释后的消毒剂分注于无菌具塞试验管。每种试验用微生物试验管分"5分钟组"、"10分钟组"和"15分钟组"共3组，每组2支。
1.4 试验步骤（接种金黄色葡萄球菌）
1.4.1微生物的接种
取金黄色葡萄球菌增殖培养物0.2ml，分别接种于上述3组共6支盛有待验证消毒剂的无菌具塞培养管，轻轻摇动，混合均匀，并立即开始计时。
1.4.2 过滤
5分钟后取上述"5分钟组"的接种细菌的消毒液，倾入过滤杯滤过；然后各用无菌生理盐水50ml清洗滤膜，滤过，重复3次。同组另一支同上操作。
1.4.3 "10分钟组"和"15分钟组"的操作
消毒剂与细菌培养物悬浮液混合10分钟后、15分钟后，重复4.2**4.3的操作。
1.4.4 培养和计数
取下滤膜放入SCD预制培养基平板，含菌膜面向上。
于32.5℃的恒温箱内培养7天。
7天后在明亮处，对平板上的菌落数进行计数。
1.4.5 阳性对照
取金黄色葡萄球菌增殖培养物0.2ml于滤杯内，加无菌纯化水进行梯度稀释**浓度为10~100cfu/ml，取稀释液体1m于SCD预制培养基平板后，按4.4培养和计数
1.5 接种白色念珠球菌的操作重复步骤4的操作。
1.6 试验结果
试验结果见下表1。
表1：PROCESS VESPHENE II消毒剂杀菌效果 单位：cfu/ml
|
时间 |
菌种 |
PROCESS VESPHENE Ⅱ |
|
5分钟 |
金黄色葡萄球菌 |
0 |
0 |
|
白色念珠球菌 |
0 |
0 |
|
10分钟 |
金黄色葡萄球菌 |
0 |
0 |
|
白色念珠球菌 |
0 |
0 |
|
15分钟 |
金黄色葡萄球菌 |
0 |
0 |
|
白色念珠球菌 |
0 |
0 |
|
阳性对照 |
金黄色葡萄球菌 |
培养24小时后即为TNTC |
|
白色念珠球菌 |
培养24小时后即为TNTC |
*备注："TNTC"为细菌太多而无法计数的英文缩写。#p#分页标题#e#
1.7 结论
消毒剂PROCESS VESPHENE II按照其产品标签的标示稀释浓度进行配置后，在5分钟时便能有效杀灭105金黄色葡萄球菌和白色念珠球菌。
2 洁净室使用后的环境验证
2.1洁净室空气净化系统恢复
确认空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差符合GMP对洁净室管理的要求。
2.2洁净室清洁
生产车间岗位操作人员，使用灭菌注射用水，按PROCESS VESPHENE II标签上标示使用浓度稀释后，按照SOP规定的洁净室清洁消毒方法，分别擦拭1万级（包括万级内的局部100级）、10万级房间地板、工作台面和墙面等区域。
2.3清洁后第2日，由品管人员到车间洁净区域对环境采样，采样项目有表面菌、沉降菌和浮游菌数，连续隔日测定，共测定3次。
2.4测定结果
各洁净区域测定结果见下列表（2、3、4）。
表2.环境监测表面附着菌测定结果 单位：cfu/皿
|
区域 |
洁净级别 |
平均菌数 |
|
**次 |
第二次 |
第三次 |
|
称量区 |
100 |
0 |
0 |
0 |
|
10，000 |
3.4 |
2.5 |
8.5 |
|
100，000 |
5 |
6 |
10.5 |
|
配液区 |
10，000 |
0.5 |
1 |
0.3 |
|
100，000 |
7 |
2 |
7 |
|
灌封区 |
100 |
0.4 |
0.6 |
0.2 |
|
10，000 |
2 |
12.5 |
1 |
|
100，000 |
0 |
5 |
4 |
|
洗净区 |
100，000 |
15.5 |
9 |
19.5 |
表3.环境监测沉降菌测定结果 位：cfu/皿
|
区域 |
洁净级别 |
平均菌数 |
|
**次 |
第二次 |
第三次 |
|
称量区 |
100 |
0 |
0 |
0.2 |
|
10，000 |
０ |
0 |
1.4 |
|
100，000 |
１ |
0 |
4.5 |
|
配液区 |
10，000 |
０ |
0 |
0 |
|
100，000 |
０ |
0 |
0 |
|
灌封区 |
100 |
０ |
0.2 |
0 |
|
10，000 |
０.9 |
0.1 |
0 |
|
100，000 |
1 |
4 |
0 |
|
洗净区 |
100，000 |
0 |
1 |
0.5 |
#p#分页标题#e#
表4.证环境监测浮游菌测定结果 单位：cfu/m3
|
区域 |
洁净级别 |
平均菌数 |
|
**次 |
第二次 |
第三次 |
|
称量区 |
100 |
0 |
1 |
4 |
|
10，000 |
０ |
6 |
0 |
|
100，000 |
50 |
2 |
70 |
|
配液区 |
10，000 |
2 |
2 |
2 |
|
100，000 |
30 |
2 |
0 |
|
灌封区 |
100 |
０ |
0 |
0 |
|
10，000 |
4 |
4 |
4 |
|
100，000 |
80 |
30 |
0 |
|
洗净区 |
100，000 |
20 |
80 |
30 |
注：采样量为100级1000升，1万级500升，10万级100升。
浮游菌浓度计算公式：（菌落数×1000）/ 采样量
以上表2、3、4的环境测定结果表明，所监测的洁净区的微生物均在公司环境质量控制范围内，各洁净区符合各自的洁净级别要求。
3 结论
消毒剂PROCESS VESPHENE II的验证结果表明，该消毒剂适用于洁净室常规的清洁消毒，并能用于洁净室的日常洁净维护。
